柏氏染色(Papanicolaou stain)

• 染色目的：

  細胞的內部細微結構，經過特別的染色化學藥物作用之後，會起化學反應而產生特別顏色，經過染色的細胞其細胞核與細胞質的細微結構，有更清楚的輪廓在顯微鏡下辦認，以幫助作臨床診斷的參考。

• 檢驗方法原理
  柏式染色法主要有四個原理：
  1.固定 
  2.核染色 
  3.細胞質染色 
  4.透明，這些原理是用不同的溶液來進行水化、脫水和浸潤。

  核染色：
  利用蘇木紫(Hematoxylin)來染核，一般有二種方法，一種是退行性染色法，用蘇木紫(Hematoxylin)來過染，然後用稀釋過的0.5%鹽酸來把超過的染色去除，然後用水把鹽酸沖洗掉，另一種是進行性染色，只染到需要的顏色強度便停止。
  酸鹼平衡：利用鹼性的氨水溶液(Ammonia water)來平衡前面步驟使用之鹽酸溶液之酸性。細胞質染色：常用的二種合成染料，第一種是Orange G (OG-6)分子量小，能很快穿透細胞質，會把角質(keratin)染成鮮橘色，第二種是EA50，由伊紅(Eosin)和Light green所組成，伊紅染成熟的扁平細胞、核仁和纖毛，Light green染代謝性強細胞，如深層、中層鱗狀上皮細胞和柱狀上皮細胞染成綠色或藍色。分色：利用1%醋酸溶液(Acetic Acid)及1%磷鉬酸溶液(Phosphotungstic Acid)將Orange G (OG-6)與EA50染在細胞質之顏色區分。固定：以95% Alcohol作固定液，至少30分鐘以上。透明：最常用二甲苯(Xylene)，目的是使細胞有透明度以利黎龤A，因二甲苯(Xylene)無色，化學性為惰性，折射率1.494，近似玻片1.515，與酒精和封片用的膠都相容的特性，能使顯微鏡的光源穿過染過色的細胞。染色步驟：

1.   Running Water 1分

2.  Gill’s Hematoxylin 3分

3.  Running Water 30秒

4.  0.25% Acid alcohol 10秒

5.  Running Water 30 秒

6.  Ammonia water 10 秒

7.  Running Water 5 分

8. 50% Alcohol 10 秒

9. 75% Alcohol 10 秒

10. 95% Alcohol 10 秒

11. OG-6 4 分

12. 95% Alcohol 15 秒

13. 95% Alcohol 15 秒

14. 1% Acetic Acid 10 秒

15. 1% Phosphotungstic Acid 10 秒

16. EA-50 7分30 秒

17. 95% Alcohol 30 秒

18. 95% Alcohol 30 秒

19. 100% Alcohol 1 分

20. 100% Alcohol 1 分

21. 100% Alcohol 1 分

22. 二甲苯 2 分

23. 二甲苯 3 分

24. 二甲苯 5 分

25. 封片

    子宮頸抹片之柏氏染色